Аквариумные рыбки, паразитологическое исследование рыб, осмотр органов, исследование крови

Паразитологическое исследование рыб


Паразитологическому исследованию необходимо подвергать живых или свежеуснувших рыб всех возрастных категорий. Органы и ткани рыб исследуют в следующем порядке: кожа, плавники, ротовая полость, жабры, глаза, кровь, сердце, брюшная полость, печень, мочевой пузырь, половые органы, кишечник, головной и спинной мозг.

Результаты исследования вносят в рабочий журнал, где указывают дату исследования, пол, возраст, длину рыбы, результаты паразитологического исследования с предварительным и окончательным определением вида паразитов.

Кожный покров. При наружном осмотре кожного покрова и плавников собирают всех паразитов, видимых невооруженным глазом (паразитические ракообразные, пиявки, нематоды и др.), предварительно определяют их и фиксируют для последующего изучения. Далее приступают к микроскопии мазков из соскобов со всей поверхности тела, а у крупных рыб — из нескольких участков. Скальпелем соскабливают слизь с кожного покрова и плавников, помещают ее на предметное стекло и смешивают с ранее нанесенными 2-3 каплями прокипяченной и остуженной воды, накрывают покровным стеклом и рассматривают сначала под лупой, а потом при малом увеличении микроскопа. Исследование возбудителя костиоза ведут при среднем и большом увеличении микроскопа.

Кроме возбудителя костиоза на коже рыб паразитируют и другие жгутиконосцы, а также инфузории, моногенетические сосальщики, паразитические рачки. Весьма часто на ней можно обнаружить споровиков, локализующихся в дермальных бугорках.

Крупных паразитов (рачков, гельминтов) подсчитывают в абсолютных числах, а мелких (споровиков, инфузорий и других) — в относительных, то есть подсчитывают число паразитов в десяти полях зрения микроскопа и определяют средние показатели. При этом высчитывают экстенсивность и интенсивность заражения каждым паразитом в отдельности для каждого вида и возраста рыб. В случае затруднения видового определения тех или иных паразитов их необходимо консервировать в соответствующих емкостях и сохранять для дальнейшей камеральной обработки. На склянку обязательно наклеивают этикетку.

Жабры. Все жаберные дуги вынимают, помещают на предметное стекло, собирают всех видимых паразитов, подсчитывают их и фиксируют. Соскоб с жаберных лепестков или целые жаберные дуги с несколькими каплями воды зажимают между двумя предметными стеклами так, чтобы они стали прозрачными, и исследуют при малом увеличении микроскопа. Споровики, некоторые инфузории и личинки сосальщиков могут находиться не на поверхности жаберных лепестков, а в особых соединительнотканных образованиях (бугорках); обнаружить и извлечь их можно только после разрыва стенки бугорка при помощи препаровальных игл. В кровеносных сосудах жабр могут находиться яйца сангвиникол, споры и мицелии гриба.

Глаза. Для обнаружения паразитов глаза извлекают из глазных впадин, помещают на предметное стекло и вскрывают острыми ножницами с внутренней каудальной стороны. Извлеченное стекловидное тело, хрусталик и содержимое передней камеры глаза компрессируют между двумя предметными стеклами и просматривают при малом увеличении микроскопа. В глазах можно обнаружить личинок сосальщика рода Diplostomum.

Кровь. Каплю крови наносят на обезжиренное предметное стекло, вносят для предотвращения свертывания немного 1% -ного раствора лимоннокислого натрия, покрывают покровным стеклом и исследуют под микроскопом. Для предотвращения высыхания крови края покровного стекла обмазывают вазелином. Одновременно несколько мазков крови высушивают на воздухе, фиксируют в метиловом спирте, окрашивают по Романовскому—Гимза или гематоксилином и также исследуют под микроскопом.

Брюшная полость. Брюшную полость вскрывают по методике, изложенной ниже (см. «Микробиологическое исследование рыб»), с той только разницей, что при паразитологическом исследовании нет необходимости соблюдать условия стерильности. Дугообразный разрез к основанию левого грудного плавника начинают от анального отверстия, вводя непосредственно в него тупой конец одной из брашн ножниц. Вскрытую брюшную полость осматривают, а имеющиеся на серозных покровах и брыжейке бугорки исследуют под микроскопом.

Сердце. Для исследования сердце помещают в бактериологическую чашку с физиологическим раствором, вскрывают его полости, промывают и образовавшийся осадок исследуют под микроскопом на наличие возбудителя сангвиниколеза.

Печень. Чтобы обнаружить паразитов, обитающих в печени, ее делят на небольшие кусочки, которые компрессируют и исследуют под лупой, затем — при слабом увеличении микроскопа.

Желчный пузырь. Для обнаружения паразитов желчный пузырь извлекают, помещают на предметное стекло, разрезают ножницами, делают соскоб с внутренней оболочки стенки пузыря. Потом сам желчный пузырь помещают между двумя предметными стеклами и исследуют под лупой и микроскопом. В желчном пузыре можно обнаружить простейших и сосальщиков.

Селезенка. Селезенку помещают между двумя стеклами, сжимают до прозрачности и исследуют под микроскопом.

Почки. Для обнаружения паразитов почки компрессируют и исследуют под микроскопом. В почках можно найти споровиков, яйца сосальщиков.

Плавательный пузырь. В случае необходимости соскоб с внутренней оболочки плавательного пузыря можно исследовать под микроскопом компрессорным методом.

Мочевой пузырь. Методика исследования сходна с исследованием желчного пузыря. В мочевом пузыре можно обнаружить сосальщиков, споровиков и инфузорий.

Половые органы. Для обнаружения паразитов железу по частям компрессируют между стеклами и просматривают под микроскопом В половых органах встречаются микроспоридии.

Желудочно-кишечный тракт. Пищевод, желудок и кишечник извлекают, освобождают от жира и печени, расправляют и вскрывают ножницами, начиная с пищевода. По ходу вскрытия обнаруженных крупных паразитов (ленточных и круглых червей, сосальщиков) извлекают и помещают в физиологический раствор. Содержимое из различных отделов желудочно-кишечного тракта исследуют компрессорным методом под микроскопом. Затем с помощью скальпеля делают глубокий соскоб со слизистой оболочки из нескольких мест и исследуют на наличие микроскопических паразитов (октомитус).

Мышцы. Чтобы обнаружить мелких паразитов, берут небольшие кусочки мышц из различных частей тела исследуют компрессорным методом под лупой и под микроскопом при малом увеличении. В мышцах можно обнаружить споровика плистофору и его цисты.

Головной и спинной мозг исследуют компрессорным методом. В этих органах можно обнаружить споровиков.

Методы окраски. Мазки крови на наличие кровепаразитов окрашивают азурэозином по Романовскому— Гимза (0,8 г азура II, 0,8 г эозина, 250 мл химически чистого глицерина и 250 мл абсолютного спирта) или метиленовой синью по Машковскому (1 г метиленовой сини и 2,5 г буры растворяют в 100 мл горячей воды).

Готовую, имеющуюся в продаже краску Романовского перед окрашиванием разводят из расчета 2-3 капли на 1 мл нейтральной дистиллированной воды. Если готовая краска отсутствует, ее можно приготовить самим. Для этой цели 1 г азура II растворяют в 1 л прокипяченной дистиллированной воды (раствор № 1) и 1 г эозина — в 1 л воды (раствор № 2). Оба раствора хранят отдельно. Перед употреблением на 1 мл нейтральной дистиллированной воды прибавляют по две капли каждого раствора. Продолжительность окраски 20-40 минут. Эритроциты окрашиваются в красный или розовый цвет, протоплазма паразитов и лейкоцитов—в синий, ядра паразитов — в красный, а лейкоцитов — в фиолетовый.

Раствор метиленовой сини перед употреблением разводят дистиллированной водой 1:10 и окрашивают мазки в течение 30 секунд, затем промывают водой и дифференцируют в течение нескольких секунд 5-10% -ным водным раствором танина. Эритроциты окрашиваются в красновато-фиолетовые тона, протоплазма простейших кровепаразитов — в ярко-голубые, ядра лейкоцитов — в фиолетовые.

Для изучения морфологии паразитических инфузорий применяют окраску железным гематоксилином по Гейденгайну (протрава 2-2,5%-ным раствором сернокислых железо-аммиачных квасцов — 1-2 часа, окраска их 1 % -ным спиртовым раствором гематоксилина в течение нескольких часов и дифференциация 1%-ным раствором 5-10 минут). Окрашивать инфузорий можно также гематоксилином Делафильда или квасцовым кармином.

Паразитических жгутиконосцев окрашивают железным гематоксилином или по Романовскому—Гимза.

Слизистых споровиков окрашивают 1 % -ным водным раствором метиленовой сини 30-60 минут, затем препарат промывают в воде, последовательно проводят через спирты возрастающей крепости (70, 80, 96%-ный и абсолютный) и просветляют ксилолом.

Трематод и цестод окрашивают квасцовым кармином. Фиксированные в спирте препараты промывают в течение нескольких часов в проточной или часто сменяемой воде, затем помещают в краску (от 1 минуты до нескольких часов, в зависимости от толщины гельминта). Продолжительность окраски можно контролировать, исследуя препараты под микроскопом.Окрашенные препараты переносят в дистиллированную воду, где в течение нескольких минут тщательно промывают от краски. Отмытых от краски паразитов осторожно сушат фильтровальной бумагой и проводят через спирты возрастающей крепости (70,80, 96% -ный), выдерживая в них несколько часов. Обезвоженных паразитов просветляют гвоздичным маслом и ксилолом.

Цестод, так же как и трематод, можно окрашивать гематеином Майера (1 г гематеина растворяют в 1 л дистиллированной воды с последующим добавлением 0,2 г йодноватокислого натрия /50 г калийных квасцов/). Гематеин допускает как прогрессивное, так и регрессивное окрашивание (без дифференцировки или с ней). При прогрессивном способе красят только 30 минут, при регрессивном — в течение 24 часов. Во втором случае для дифференциации препарат обрабатывают в 1%-ном солянокислом спирте с последующим тщательным отмыванием краски в проточной воде в течение 20-30 минут.

Хорошие результаты получают при окраске мелких цестод молочнокислым кармином по Блажину. Молочную кислоту разводят вдвое дистиллированной водой, добавляют в нее небольшое количество кармина (в зависимости от желаемой степени окраски), жидкость кипятят. Красить лучше свежие нефиксированные объекты. Продолжительность окраски контролируют под микроскопом, а в случае перекрашивания объект переносят в цельную молочную кислоту для обесцвечивания. Окрашенный препарат промывают в течение 20-60 минут водопроводной водой и помещают в бальзам.

Для окраски крупных цестод этот способ модифицирован. Цестод в течение суток промывают в проточной или часто сменяемой водопроводной воде при комнатной температуре. Затем гельминтов помещают на 4-6 часов в краску (0,3 г кармина на 100 мл молочной кислоты), контролируя интенсивность окрашивания под микроскопом, после чего на сутки их переносят в дистиллированную воду с добавлением в нее трех капель раствора сернокислого железа и двух капель 1 % -ного раствора карболовой кислоты.В дальнейшем цестод переносят на чистое большое стекло, расправляют на нем и высушивают при температуре 37 °С (не выше, иначе препарат сморщится). Высохший, очень плотно приставший к стеклу препарат заливают канадским бальзамом или канифолью, растворенной в смеси, состоящей из равных частей хлороформа и абсолютного спирта.

Паразитических рачков исследуют в той же жидкости, в которой они хранятся. Красить их не обязательно. Иногда прибегают к окраске борным кармином, эозином, сафранином.

Больше информации о жизнедеятельности и размножении рыбок на специализированном сайте kwitri.ru.




Ветеринария

Интересное

Выставки

 
Rambler's Top100

©2006-2016 PetsHealth.ru

Данный сайт носит информационный характер и ни при каких условиях не является публичной офертой, определяемой положениями Статьи 437 ГК РФ.