Исследование проб. Часть 1
Пробу надо держать в тепле
Это имеет большое значение, поскольку:
- охлаждение вызывает уменьшение подвижности сперматозоидов, что может создать ложное представление о качестве пробы;
- быстрое понижение температуры может вызвать повреждение сперматозоидов, однако с семенем собак это случается редко, поскольку оно относительно устойчиво к «холодовому шоку», а забирают его обычно при комнатной температуре.
Объем эякулята
Измеряется при помощи градуированной пробирки. Объем первой фракции обычно составляет 0,5-2 мл. Объем второй фракции 0,5-3 мл. Объем третьей фракции - 15-20 мл, но зачастую целиком эту фракцию не забирают.
Цвет эякулята
Как правило, первая фракция прозрачная, хотя может быть загрязнена мочой или фрагментами клеток, находившимися в уретре. Вторая фракция - белого или кремового цвета. Третья фракция обычно прозрачна. Иногда наблюдается загрязнение кровью (особенно третьей фракции, взятой у собак среднего возраста или старых) либо другими клетками, которые могут вызвать изменение цвета. Если цвет пробы изменился, то исследование окрашенного мазка семени (например, с использованием модифицированных красителей Райта - Гимзы, Дифф - Куика) может позволить идентифицировать загрязняющий клеточный материал (например, выявить клетки красной или белой крови).
Концентрация сперматозоидов
Ее можно измерить при помощи:
- электронно-счетной камеры, которая калибрована для клеток данного размера (поскольку хвостики сперматозоидов могут застревать, вставая поперек отверстия данного устройства, часто оно дает неточные результаты);
- колориметра, предварительно калиброванного для семени собаки; этот метод явно неточен;
- гемоцитометра после надлежащего разбавления пробы:
- пробу семени нужно тщательно перемешать и разбавить в пропорции 1:200 дистиллированной водой, содержащей немного детергента (первая убивает сперматозоиды, а вторая предотвращает их группирование);
- одну каплю помещают в счетную камеру, которая имеет стандартную глубину; на поверхности камеры выгравирована решетка. Подсчет сперматозоидов внутри решетки (благодаря области распространения известен объем) позволяет вычислить их первоначальную концентрацию. Обычно подсчитывают квадраты крест-накрест по диагонали. Нормальное значение составляет 300-800 х 106 в 1 мл.
Общее количество сперматозоидов
Подсчет общего количества сперматозоидов даст большую информацию, чем измерение их концентрации. Нормальное значение для здоровых собак составляет 300-1000 х 106 сперматозоидов при каждой эякуляции.
Процент подвижности (мобильности)
Сосуд, содержащий семя, следует немедленно поместить в ванну, температура воды в которой 37 °С. Затем каплю семени наносят на теплое предметное стекло микроскопа и накрывают покровным стеклом; исследование при низкой температуре приводит к ошибочным результатам.
Пробу необходимо исследовать при сильном и слабом увеличении.
Оценка подвижности сперматозоидов весьма субъективна, однако это можно исправить за счет постоянного наблюдения.
Пробы следует оценивать с точки зрения определения процента прогрессирующей мобильности; чтобы облегчить изучение мобильности сперматозоидов, ее можно разделить на пять категорий: категория 0: сперматозоиды неподвижны; категория I: сперматозоиды подвижны, но не прогрессируют; категория II - сперматозоиды подвижны, но слабо прогрессируют; категория III: сперматозоиды подвижны и прогрессируют умеренными темпами; категория IV - сперматозоиды подвижны и быстро прогрессируют (то есть быстро плывут вперед). При помощи этого критерия удалось выяснить, что у здоровых собак свыше 70 % сперматозоидов относятся к IV категории мобильности.
Сперматозоиды могут казаться сгруппировавшимися друг с другом и другими клетками (эпителиальными или макрофагами); значение этого явления у собак еще не выяснено, однако если это никак не влияет на всю пробу, то, вероятно, не может считаться плохим диагностическим признаком.
Могут наблюдаться мелкие круглые клетки (эритроциты или полиморфно-ядерные лейкоциты); чтобы провести различие между ними, может потребоваться взятие мазка крови. К тому времени, когда предметное стекло поместят под микроскоп, подвижность сперматозоидов спадает (вероятно, в результате воздействия света и охлаждения).
